Независимая лаборатория «Инвитро»

№1158 Трофобластный гормон (ТБГ)

ТБГ представляет собой гликопротеин с молекулярной массой 75 кДа, синтезируется клетками трофобласта и является специфическим маркером функции плаценты и беременности. В низких концентрациях (0,2-10 нг/мл) он определяется в крови здоровых небеременных женщин.

Одним из наиболее важных физиологических эффектов ТБГ является его способность подавлять реакции отторжения эмбриона и плода (иммуносупрессивное действие), необходимое для нормального развития беременности.

Изменение концентрации ТБГ наблюдается при врожденных пороках развития плода, что можно использовать в диагностике внутриутробной патологии, наряду с исследованием концентрации АФП и ХГЧ.

Определение ТБГ используется для диагностики и мониторинга ряда онкологических заболеваний, и, в первую очередь, опухолей трофобласта. Обнаружение ТБГ при раке матки и яичников свидетельствует о повышенной злокачественности опухоли.

№5251 Рецепторы к эстрогенам и прогестерону (иммуногистохимическое исследование)» в парафиновом блоке

Комплексное исследование биоптатов. Включает морфологическое описание рецепторов к эстрогенам (ЭР) и прогестерону (ПР) и оценку их экспрессии.

Рецепторы к эстрогенам (ЭР) и прогестерону (ПР) относятся к внутриклеточным рецепторам стероидных гормонов. Они присутствуют в различных тканях-мишенях, в том числе в молочных железах и матке, где участвуют в механизмах гормональной индукции синтеза матричной РНК, белков, высвобождении цитокинов и факторов роста.

ЭР и ПР вовлечены в механизмы развития и метастазирования опухолей. Исследование экспрессии ЭР и ПР входит в стандарт обследования больных раком молочной железы, так как позволяет определить гормональную чувствительность опухоли, уточнить прогноз заболевания и потенциальный эффект гормонального лечения.

Исследование ЭР и ПР также используют в диагностике и прогнозе развития следующих патологических состояний: нарушения женской репродуктивной функции, бесплодие, гиперплазия эндометрия, злокачественные заболевания тела матки.

Опухоли молочной железы

Рак молочной железы – самое распространенное онкологическое заболевание у женщин (частота встречаемости в течение жизни у женщин в возрасте от 13 до 90 лет – 1:9-1:13). Большинство этих опухолей гормонально зависимы, эстрогены и прогестерон стимулируют их рост и метастазирование. Данные гормоны также способствуют развитию некоторых видов рака молочной железы.

Исследование экспрессии ЭР и ПР в биоптате опухоли в настоящее время рекомендовано проводить всем больным раком молочной железы для определения гормональной чувствительности опухоли, уточнения прогноза заболевания и потенциального эффекта гормонального лечения.
Опухоли с высоким содержанием ЭР и ПР, как правило, высокодифференцированные, с низкой пролиферативной активностью и минимально агрессивным течением, они хорошо отвечают на гормональную терапию и обычно имеют хороший прогноз. Эффективность гормональной терапии составляет около 50% при опухолях, экспрессирующих рецепторы к эстрогенам (ЭР+), и доходит до 75% при опухолях, экспрессирующих рецепторы как к эстрогенам, так и к прогестерону (ЭР+/ПР+).

Если опухолевые клетки экспрессируют мало рецепторов к эстрогенам (ЭР-), гормональная терапия обычно неэффективна. Исключение составляют варианты, когда клетки опухоли экспрессируют рецепторы к прогестерону (ЭР-/ПР+) – гормональная терапия эффективна у 10% таких больных.

Несмотря на то, что изредка резистентность к гормональной терапии наблюдается даже у пациентов с ЭР+/ПР+ опухолями, в настоящее время исследование ЭР и ПР в опухолевой ткани входит в «золотой стандарт диагностики» при раке молочной железы наряду с определением герцепт-статуса (HER-2, рецептор 2-го типа человеческого эпидермального фактора роста) и пролиферативной активности.

Частота встречаемости рецепторов к эстрогенам и прогестерону в клетках опухоли рака молочной железы:

•Около 75% всех раковых опухолей молочной железы эстроген-позитивны (ЭР+).

•Около 65% эстроген-позитивных опухолей имеют также рецепторы к прогестерону (ЭР+/ПР+).

•Около 25% всех раковых опухолей молочной железы эстроген-прогестерон-негативны (ЭР-/ПР-), либо их гормональный статус неизвестен.

•Около 10% всех раковых опухолей молочной железы эстроген-позитивны и при этом прогестерон-негативны (ЭР+/ПР-).

•Около 5% всех раковых опухолей молочной железы эстроген-негативны и при этом прогестерон-позитивны (ЭР-/ПР+).

Бесплодие

Стероидная рецепция эндометрия при бесплодии существенно меняется. Получены достоверные данные о снижении количества прогестерон-позитивных стромальных клеток, повышенной экспрессии α-эстрогенов в железистых и стромальных клетках как при первичном, так и при вторичном бесплодии. Исследование ЭР и ПР позволяет №525 ИГХ Рецепторы к эстрогенам и прогестерону (иммуногистохимическое исследование) оценить потенциальную способность эндометрия к нидации плодного яйца.

Не менее важна оценка состояния эндометрия перед назначением высоких доз гормональных препаратов в программах ЭКО. С одной стороны, гормональные препараты оказывают существенное влияние на систему рецепторов, с другой – нарушения в рецепторном аппарате могут привести к недостаточной восприимчивости эндометрия к экзогенному гормональному воздействию.

Восприимчивость эндометрия к воздействию эндогенных гормонов и гормональных препаратов можно определить с помощью соответствующих иммуногистохимических маркеров.

Гиперплазия эндометрия

Уровень экспрессии ЭР и ПР при простой железистой гиперплазии эндометрия без атипии не зависит ни от возраста женщины, ни от наличия неопухолевой гинекологической патологии (хронического эндометрита, полипов эндометрия, фолликулярных кист яичников). Это позволяет сделать вывод, что женщин постменопаузального возраста следует лечить консервативно.

Вне зависимости от возраста простая железистая гиперплазия эндометрия с кистозными изменениями желез характеризуется снижением экспрессии ЭР в эпителии кист по сравнению с экспрессией ЭР в неизмененных железах.

Рак тела матки

Эндометриальные карциномы – гетерогенная группа опухолей, состоящая из разных нозологических форм, характеризующихся различным клиническим течением и выживаемостью больных (ВОЗ, Histological Typing Tumors of Female Genital Organs, 2003). Однако даже при одной и той же нозологической форме, например, при наиболее частой разновидности рака тела матки – эндометриоидной аденокарциноме – применяемые методы лечения оказываются неэффективными у каждой пятой больной. Биологическое поведение опухоли, обусловленный им вариант клинического течения и прогноз заболевания остаются недостаточно предсказуемыми даже для больных с одной и той же формой рака тела матки.

Гормонально-рецепторный статус – важнейшая характеристика, определяющая клиническое течение заболевания и выживаемость больных эндометриоидным раком тела матки. Известно, что неопухолевая гинекологическая патология (хронический эндометрит, полип эндометрия, наличие фолликулярных кист яичника) не влияет на рецепторный статус эндометрия.

В опухолях эндометрия экспрессия рецепторов зависит от степени дифференцировки опухолевой ткани. Снижение дифференцировки клеток злокачественных опухолей приводит к снижению экспрессии рецепторов половых стероидов. В низкодифференцированных опухолях количество ЭР+ и ПР+ клеток достоверно меньше, чем в высокодифференцированных опухолях. Та же закономерность существует в отношении ПР+ клеток в опухолях с умеренной степенью дифференцировки по сравнению с высокодифференцированными карциномами.
Подготовку определяет лечащий врач.

Показания к назначению:

•Рак молочной железы – для оценки гормональной чувствительности опухоли, уточнения прогноза и выбора метода лечения.

•Первичное/вторичное бесплодие – для оценки потенциальной способности эндометрия к нидации (имплантации) плодного яйца.

•Рак тела матки – для оценки гормональной чувствительности опухоли, уточнения прогноза и выбора метода лечения.

•Нарушения менструального цикла, дисфункция яичников, гиперплазия эндометрия – в качестве дополнительного исследования для оценки потенциальной эффективности гормональной терапии.

№946 Хромогранин А (Chromogranin A, CgA)

Хромогранин А – гликопротеин с молекулярной массой около 49 кДа, относится к семейству хромогранинов, являющихся основным компонентом содержимого крупных оптически плотных гранул большинства нейроэндокринных клеток. При специфической стимуляции таких клеток хромогранины секретируются вместе с пептидными гормонами и нейропептидами. Хотя функции этих белков досконально не изучены, показано, что хромогранины (из которых хромогранин А является наиболее изученным) играют важную роль в процессах образования, созревания, внутриклеточной транспортировки и экзоцитоза секреторных гранул в нейроэндокринных клетках и нейронах. Кроме того, в результате ферментативного расщепления хромогранинов образуется ряд более мелких пептидов, обладающих различной биологической активностью.

В качестве специфичных маркеров нейроэндокринных опухолей разного происхождения, в рамках комплексной диагностики, обычно используют их специфические продукты (катехоламины и их метаболиты – при подозрении на феохромоцитому, серотонин и его метаболит 5-ОИУК – при подозрении на карциноид, гипофизарные гормоны – при подозрении на опухоли гипофиза и т. п.). Хромогранин А является важнейшим универсальным маркером нейроэндокринной ткани и различных нейроэндокринных опухолей. Чувствительность этого показателя в качестве опухолевого маркера нейроэндокринных опухолей варьирует от 10 до 100% в зависимости от типа опухоли и стадии заболевания. Исследование хромогранина А в сыворотке крови находит клиническое применение, прежде всего, в комплексной диагностике карциноидных опухолей (несекретирующие серотонин опухоли могут сохранять способность продуцировать хромогранин А). Определение уровня хромогранина А может быть полезно в комплексной диагностике феохромоцитомы, нейробластомы, медуллярного рака щитовидной железы, опухолей, происходящих из островкового аппарата поджелудочной железы, и др.

Повышение уровня хромогранина А в сыворотке коррелирует с размером, распространенностью, гистопатологическими характеристиками нейроэндокринных опухолей. Оно ярче выражено при больших, хорошо дифференцированных и метастатических опухолях.

Тест предназначен для использования в комплексной диагностике и обследованиях пациентов с характерными признаками и симптомами нейроэндокринных опухолей и не рекомендован к применению для скрининга в общей популяции или для использования в целях определения тяжести заболевания.

Причиной повышения уровня хромогранина А, помимо нейроэндокринных опухолей, могут быть атрофический гастрит, гастриты, связанные с инфекцией Helicobacter pylori (параллельно с повышением секреции гастрина), почечная недостаточность, патология печени (цирроз, хронические гепатиты), доброкачественная гиперплазия и карцинома простаты. Небольшое повышение хромогранина А отмечали при язвенных колитах и болезни Крона, болезни Паркинсона, ревматоидном артрите, гиперпаратиреоидизме, гипертиреоидизме, сердечной недостаточности, у части пациентов с опухолями, не относящимися к нейроэндокринным (груди, легких, желудочно-кишечного тракта и пр.). Следует учитывать, что две группы лекарственных препаратов оказывают значительное влияние на концентрацию хромогранина: ингибиторы протонной помпы и блокаторы H2-рецепторов гистамина.

Подготовка:

Предпочтительно утром натощак, после 8-12 часового периода ночного голодания. В случае приема лекарственных препаратов (наиболее значимы препараты из групп ингибиторов протонной помпы и блокаторов H2-рецепторов гистамина), следует обсудить с лечащим врачом возможность их временной отмены (не менее 3 периодов полувыведения для ингибиторов протонной помпы). Возможно влияние глюкокортикоидов на результат исследования.

Показания к назначению:

В качестве неспецифического маркера нейроэндокринных опухолей, в дополнение к стандартным методам обследования при подозрении на нейроэндокринные опухоли (карциноид, феохромоцитома, медуллярный рак щитовидной железы).

№TRO Тромбоциты, микроскопия (подсчет в окрашенном мазке по методу Фонио)

Подсчет тромбоцитов входит в состав общего анализа крови и обычно проводится с помощью гематологического анализатора импедансным методом (см. тест №5 «Общий анализ крови»). В лаборатории ИНВИТРО при всех результатах автоматического определения тромбоцитов менее 130х103 клеток/мкл и более 550х103 клеток/мкл врач дополнительно проводит микроскопию окрашенного мазка крови с подсчетом количества тромбоцитов по методу Фонио. При некоторых клинических состояниях (в том числе при выраженных тромбоцитопениях и тромбоцитозах, при мониторинге терапии) может быть целесообразным подсчет количества тромбоцитов по методу Фонио вне зависимости от концентрации тромбоцитов. Данное исследование решает эту задачу.

Исследование «Тромбоциты, микроскопия» отдельно не выполняется, только в комплексе с тестом №5 «Общий анализ крови».

Подготовка - желательно натощак.

Показания к назначению:

•диагностика полицитемий, тромбоцитопений, тромбоцитозов;

•мониторинг терапии.

№324 Вирус гепатита С: количественное определение РНК вируса и генотипирование (Hepatitis C Virus (HCV) RNA, Quantitative PCR and Genotyping)

Определение вирусной нагрузки и генотипа (1, 2, 3) вируса гепатита С (ВГС).

Гепатит С – вирусное заболевание печени, которое часто переходит в хроническую форму (55-85% инфицированных). У части таких пациентов (15-30%) хронический гепатит в течение 20 лет может приводить к циррозу печени и повышению риска развития карциномы печени. Прогноз заболевания и эффективность противовирусной терапии зависят от генотипа вируса, применяемой терапии, индивидуальных характеристик пациента.

Гепатит С не всегда требует лечения. У некоторых людей, благодаря иммунной реакции, а также в зависимости от штамма вируса, инфекция самопроизвольно прекращается. У части пациентов с хронической инфекцией существенного повреждения печени не происходит. В лечении гепатита С в настоящее время достигнут значительный прогресс, разработаны новые противовирусные препараты. Стандарты лечения пациентов с гепатитом С быстро меняются. Для выбора оптимального подхода к терапии, определения схемы и длительности лечения пациента рекомендуется провести некоторые дополнительные лабораторные исследования, прежде всего, исследование генотипа вируса. Согласно рекомендациям Минздрава РФ от 3 сентября 2014 г., генотипирование вируса гепатита С должно выполняться всем пациентам до начала противовирусной терапии в целях планирования ее продолжительности, прогнозирования эффективности, в отдельных случаях – для расчета дозы противовирусных препаратов (см. также тест №2447 «Интерлейкин 28 бета – IL28B, генотипирование»).

Различают шесть основных генотипов (1, 2, 3, 4, 5, 6) и множественные субтипы (1a, 1b, 1c и т. п.) вируса гепатита С (ВГС). ВГС 1 генотипа является преобладающим по частоте встречаемости и труднее поддается лечению. ВГС генотипов 2 и 3 менее агрессивен и легче поддается лечению. ВГС генотипов 4, 5 и 6 в нашей стране практически не встречается. Предлагаемый тест позволяет идентифицировать генотипы 1, 2, 3 вируса гепатита С.

Эффективность лечения оценивают по вирусологическому ответу, который определяют по динамике изменения концентрации вируса в крови. Поэтому до начала лечения необходимо установить исходную вирусную нагрузку (концентрацию вирусных частиц в крови). Целью терапии является полное излечение, т. е. элиминация вируса.
Подготовки специальной не требуется.

Показания к назначению:

Исследование целесообразно проводить пациентам с установленным диагнозом хронического гепатита C (при положительном результате исследования РНК вируса гепатита С в крови) до начала проведения противовирусной терапии:

•в целях прогноза течения, вероятного ответа на терапию, выбора тактики лечения пациентов с хроническим гепатитом С;

•для установления исходной вирусной нагрузки перед началом терапии хронического гепатита C с целью последующего контроля эффективности лечения.

№ASTR1 Биохимический скрининг 1-го триместра беременности для программы Астрайя (Astraia)
Комплекс тестов биохимического скрининга 1-го триместра беременности с применением технологии Cobas е (Roche), результаты которого могут использоваться врачами для самостоятельной работы в модуле расчета риска хромосомных аномалий плода Astraia (FMF).

Состав профиля:

•свободная бета-субъединица ХГЧ (технология Cobas е, Roche);
•PAPP-A (технология Cobas е, Roche).

В настоящее время для проведении неинвазивного комбинированного (УЗИ и биохимического) скрининга беременных в целях выявления хромосомных аномалий плода в России используются две программы расчета итогового статистического риска наличия такой патологии: программа PRISCA, Typolog Software (см. профили PRISCA) и программа Astraia (Astraia Software, Gmbh).

Программа Astraia – продукт, разработанный для FMF (Fetal Medicine Foundation, Институт медицины плода, Великобритания). FMF принадлежат права на использование этой программы. Возможность пользоваться программой для проведения расчета риска хромосомной патологии плода предоставляется исключительно специалистам, зарегистрированным на сайте этой организации, имеющим лицензию и сертификат FMF. Программа Astraia, в соответствии с заложенными в ней данными по медианам биохимических показателей, предполагает использование строго определенных лабораторных технологий при проведении соответствующих исследований. Независимая лаборатория ИНВИТРО предоставляет возможность проводить «двойной тест» биохимического скрининга хромосомной патологии плода 1-го триместра беременности с применением технологии, рекомендованной FMF для применения в программе Astraia. Полученные результаты могут быть использованы врачами, обладающими действующим сертификатом FMF и лицензией на использование этого программного продукта для самостоятельной работы в программе Astraia (модуль расчета риска хромосомных аномалий плода). Выбор времени проведения биохимического скрининга беременных определяется стратегией медицинского центра. Один из возможных вариантов – обследование беременной по системе одного посещения клиники (OSCAR – One Stop Clinics for Assessment of Risk), когда УЗИ 1-го триместра и взятие крови для проведения биохимического скрининга проводятся в один день (оптимально на сроке 12-ти недель). Второй возможный вариант – проведение биохимического скрининга на сроке 9-10-ти недель (более информативный для этой комбинации биохимических маркеров), а УЗИ-скрининга на сроке 12-ти недель (оптимальный срок для УЗИ 1-го триместра). После получения всех результатов врач проводит комбинированный расчет риска наличия хромосомных аномалий плода в программе Astraia. При условии применения порогового уровня риска 1:100 для выделения повышенного риска наличия трисомии 21 у плода программа Astraia позволяет достичь 95% уровня выявления этой патологии при 2,5% уровне ложноположительных результатов, используя комбинированный расчет статистического риска с учетом возраста беременной, УЗИ-маркеров и результатов биохимического скрининга 1-го триместра. Для дальнейшей точной диагностики хромосомных аномалий плода в случае выявления повышенного риска необходимы инвазивные диагностические исследования.

Характеристики показателей:

1.Бета-ХГЧ, свободный. Хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) – гликопротеиновый гормон, состоящий из двух субъединиц – альфа и бета. В физиологических условиях выявляется в крови только при беременности. Гормон синтезируется тканью трофобласта, начиная с первых недель гестации, поддерживая функционирование желтого тела и стимулируя продукцию стероидов. Концентрация ХГЧ быстро растет до 8-9-ти недель беременности, затем (через некоторое время) начинает плавно снижаться. В сыворотке крови беременных содержится в основном интактный ХГЧ и лишь небольшое количество свободной бета-субъединицы (около 1% относительно содержания интактных молекул). Трисомия 21 (синдром Дауна) у плода обычно характеризуется двукратным повышением концентрации свободного бета-ХГЧ в крови матери, что позволяет применять этот маркер при пренатальной оценке риска данной патологии.

2.PAPP-A (Pregnancy-Associated Plasma Protein A) – ассоциированный с беременностью белок А – гликопротеин, принадлежащий к семейству цинк-связывающих металлопротеиназ. Впервые выявлен в крови беременных как продукт синцитиотрофобласта плаценты. Позднее было установлено, что его могут синтезировать и другие типы клеток. Концентрация PAPP-A при беременности постепенно повышается вплоть до родов. По своим функциональным характеристикам он обладает способностью расщеплять белки, связывающие инсулиноподобный фактор роста 1 (ИФР-1), тем самым освобождая и активируя его. Уровень PAPP-A в крови у беременных в 1-м триместре при трисомии 21 у плода, как правило, вдвое ниже значений PAPP-A у беременных в отсутствие патологии, что используют при оценке риска наличия трисомии 21.

Подготовка:

Предпочтительно натощак, не ранее 4-х часов после последнего приема пищи. Биохимический скрининг допускается проводить на сроке 9-13-ти недель беременности (максимально до 13-ти недель 6-ти дней). При планировании одновременного проведения скринингового УЗИ 1-го триместра и взятия пробы для выполнения биохимического скрининга оптимальным сроком является 12 недель беременности.

Показания к назначению:

Проведение беременным «двойного теста» 1-го триместра беременности с применением технологии Cobas e (Roche) для самостоятельного использования врачом программы Asrtaia (модуль расчета риска хромосомной патологии плода).